【產品名稱】:大鼠嗜酸性粒細胞陽離子蛋白試劑盒

【敏感性】： ＜5pg/ml

【特異性】： 系統和其它細胞因子無交叉反應。

【保存】： -20℃ [短期內（如兩周）可4℃]

【有效期】： 12個月（-20℃）。

【用途】： 用于體外定量分析液體標本（通用型）。

標本收集:

1.血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，收集血液的試管應為一次性的無熱原，無內毒素試管。

2.血漿：抗凝劑推薦使用EDTA，標本采集后30分鐘內于 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測。避免使用溶血，高血脂標本。

3. 其它生物標本：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測

4. 標本應清澈透明，懸浮物應離心去除。

5.標本收集后若不及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃/-80℃電冰箱內，避免反復凍融，1-6月內檢測,4℃保存的應在1周內進行檢測。

6. 如果您的樣本中檢測物濃度高于標準品值，請根據實際情況，做適當倍數稀釋（建議先做預實驗，以確定稀釋倍數）。

試驗所需自備物品:

1.  酶標儀（450nm波長濾光片）

2.  高精度移液器，EP管及一次性吸頭：0.5-10μl, 2-20μl, 20-200μl, 200-1000μl

3.  37℃恒溫箱, 雙蒸水或去離子水

4.  吸水紙

檢測前準備工作:

1. 請提前20分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。

2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋（1:25）。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結晶，屬于正常現象，可用40℃水浴微加熱使結晶完全溶解后再配制洗滌液。（加熱溫度不要超過50℃）使用時洗滌液應為室溫。

3.  標準品: 加入標準品&標本稀釋液1.0ml至凍干標準品中，靜置10分鐘，待其充分溶解后，輕輕混勻（濃度為5000 pg/ml）。然后根據需要進行倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋）。建議配制成以下濃度： 2500、1250、625、312.5、156.2、78.1、39.05、0 pg/ml。樣品稀釋液直接作為空白孔 0 pg/ml。如配制2500pg/ml標準品：取0.5ml （不要少于0.5ml ）5000pg/ml的上述標準品加入含有0.5ml樣品稀釋液的EP管中，混勻即可，其余濃度以此類推。

4. 生物素化抗體工作液：實驗前計算當次實驗所需用量（以100μl/孔計），實際配制時應多配制100-200μl。使用前15分鐘，以生物素化抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體（1:100）成工作濃度。當日使用。

5. 酶結合物工作液：實驗前計算當次實驗所需用量（以100μl/孔計），實際配制時應多配制  100-200μl。使用前15分鐘，以生物素化抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體（1:100）成工作濃度。當日使用。

洗滌方法:

1. 自動洗板機：每孔加入洗滌液350μl，注入與吸出間隔60秒。洗板5次。

2. 手工洗板：甩盡孔內液體，在潔凈的吸水紙上拍干，每孔加洗滌液350μl，浸泡1-2分鐘，吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體，在厚的吸水紙上拍干。洗板5次。

大鼠嗜酸性粒細胞陽離子蛋白試劑盒操作步驟:

實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫；試劑或樣品配制時，均需充分混勻，并盡量避免起泡。

1、 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣時將樣品加于酶標板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。給酶標板覆膜，37℃孵育2小時。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2、 棄去液體，甩干，每個孔中加入Detection Ab工作液 100μl（在使用前15分鐘內配制），酶標板加上覆膜，37℃溫育1小時。

3、 棄去孔內液體，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分鐘，大約350μl /每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內液體拍干。

4、 每孔加HRP Conjugate工作液（臨用前15分鐘內配制）100μl，加上覆膜，37℃溫育1小時。

5、 棄去孔內液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。

6、 每孔加底物溶液100μl，酶標板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右（根據實際顯色情況酌情縮短或延長，但不可超過30分鐘。當標準孔出現明顯梯度時，即可終止）。

7、 每孔加終止液50μl，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。

8、 立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度（OD值）。應提前打開酶標儀電源，預熱儀器，設置好檢測程序。

9、 實驗完畢后將未用完的試劑按規定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結束。

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更新時間：2024/8/27 9:20:44